Приготовление сред BG-11 и BG-11-N из стоковых растворов
Для
приготовления 1 л
среды добавить к
600 мл дистиллированной
воды:
| BG-11 | BG-11-N |
| Раствор 1 | 2 | 2 |
| Раствор 2 | 50 | - |
| Раствор 3 | 2 | 2 |
| Раствор 4 | 1 | 1 |
| Раствор 5 | 1 | 1 |
| Раствор 6 | 40 | 40 |
| Раствор 7 | - | 1 |
| Раствор 8 | - | 1 |
Прописи соответвующих растворов:
Раствор 1 (1л)
Добавить к 600 мл воды:
| лимонная кислота | 3 г |
| Fe3+/NH4+-цитрат (коричневый, 16-19% Fe) | 3 г |
| ЭДТА·Na2 | 0,5 г |
Довести объем деионизированной водой до
1 литра. Раствор разлить по
пластиковым 50 мл пробиркам, одну пробирку оставить для использования,
остальные хранить при -20°С. Для получения
стерильного раствора профильтровать через 0,2 мкм фильтр в стерильном ламинаре.
Раствор 2 (1л)
Добавить к 600 мл воды:
| NaNO3 | 30 г |
| K2HPO4(×3H2O) | 0,78 (1,02) г |
| MgSO4×7H2O | 1,5 г |
Довести объем деионизированной водой до
1 литра. Не автоклавировать (иначе выпадает осадок)!
Раствор 3 (100 мл)
Добавить к 60 мл воды:
| CaCl2 (×2H2O) | 1,9 (2,5) г |
Довести объем деионизированной водой до
100 мл. Можно проавтоклавировать.Раствор 4 (100 мл)
Добавить к 60 мл воды:
Довести объем деионизированной водой до
100 мл. Можно проавтоклавировать.Раствор 5 (микроэлементы)
(1л)
Добавить к 600 мл
воды:
| H3BO3 |
2,86 г |
| MnCl2×4H2O |
1,81 г |
| ZnSO4×7H2O |
0,22 г |
| Na2MoO4×2H2O |
0,4 г |
| CuSO4×5H2O |
0,08 г |
| Co(NO3)2×7H2O |
0,05 г |
Довести объем деионизированной водой до
1 литра. Раствор разлить по
пластиковым пробиркам или банкам, одну пробирку оставить для использования,
остальные хранить при -20°С.
Для получения
стерильного раствора профильтровать через 0,2 мкм фильтр в стерильном ламинаре.
Раствор 6 (буфер) (1л)
Добавить к 600 мл воды:
Довести pH до 7,5 добавлением 10 M NaOH (около 20 мл). Довести объем деионизированной водой до
1 литра. Автоклавировать обязательно (легко зарастает).
Раствор 7 (100 мл)
Добавить к 60 мл воды:
Довести объем водой до
100 мл. Можно проавтоклавировать.
Раствор 8 (100 мл)
Добавить к 60 мл воды:
| K2HPO4 (×3H2O) | 3,9 (5,148) г |
Довести объем водой до
100 мл. Можно проавтоклавировать.
Довести
объем среды до 1 л, автоклавировать. Раствор 6 (буфер) можно не
добавлять, если условия выращивания не интенсивные. Раствор 1 (железо)
и 5 (микроэлементы) можно добавлять стерильно после автоклавирования,
т.к. при автоклавировании часть соединений железа и других металлов,
входящих в состав раствора микроэлементов, выпадает в осадок.
Для приготовления твердой среды добавить 12 г агара на 1 л среды