Stoks ASP 2

Приготовление сред ASP 2 и ASP 2-N из стоковых растворов

Для приготовления 1л среды добавить к 600 мл дистиллированной воды:

Стоковый раствор	ASP 2	ASP 2-N
Na₂-EDTA (3 г/л)	10 мл	10 мл
KCl (60 г/л)	10 мл	10 мл
CaCl₂×2H₂O (37 г/л)	10 мл	10 мл
Буфер (0,5 M раствор HEPES-Na с pH 8)	40 мл	40 мл
MgSO₄×7H₂O (75 г/л)	10 мл	10 мл
раствор микроэлементов P1	1 мл	1 мл
раствор FeCl₃ + 10 М HCl	1 мл	1 мл
K₂HPO₄(×3H₂O) (50 (65,5) г/л)	1 мл	1 мл
NaNO₃ (150 г/л)	10 мл	-
NaCl	18 г	18 г

Довести объем среды до 1 л, автоклавировать. Растворы, содержащие FeCl₃ и микроэлементы можно добавлять стерильно после автоклавирования, т.к. при автоклавировании часть соединений железа и других металлов, входящих в состав раствора микроэлементов, выпадает в осадок. В этом случае эти растворы должны быть простерилизованы через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм.

Для приготовления твердой среды добавить фитагель (Phytagel) в концентрации 11 г/л, тщательно перемешать перед автоклавированием. Среду с фитагелем необходимо разлить горячей (70-80 °С), повторно она не расплавится.

Буфер

Добавить к 600 мл деионизированной воды:

HEPES натриевая соль

130,15 г

Довести pH до 8 добавлением концентрированной HCl. Довести объем деионизированной водой до 1 литра. Автоклавировать обязательно (легко зарастает).

Раствор микроэлементов P1 (не автоклавировать)

Добавить к 600 мл деионизированной воды

H₃BO₃	34, 3 г
MnCl₂×4H₂O	4,32 г
ZnSO₄×7H₂O	0,668 г
CuSO₄×5H₂O (0,1 г / 5 мл)*	150 мкл
CoCl₂×6H₂O (0,1 г / 5 мл)*	600 мкл
Na₂MoO₄×2H₂O (0,11 г / 5 мл)*	2 мл

*приготовить свежие растворы непосредственно перед использованием

Довести объем деионизированной водой до 1 л.

Для получения стерильного раствора профильтровать через 0,2 мкм фильтр в стерильном ламинаре. Раствор разлить по пластиковым пробиркам, одну пробирку оставить для использования, остальные хранить при -20°С.

Раствор FeCl₃ + 10 М HCl (не автоклавировать)

Добавить к 600 мл деионизированной воды

FeCl₃×6H₂O	3,9 г
10 M HCl	10 мл

Довести объем деионизированной водой до 1 л.