Среда TAP
Среда готовиться из заранее приготовленных растворов по следующей прописи:
| Раствор Бейерника | 50 мл |
| Раствор В | 0,375 мл |
| Микроэлементы Hunters | 1 мл |
| 2М Tris-AcOH | 10 мл |
| Агар | 15 г |
| Вода дистилированная | до 1000 мл |
Рекомендации по
приготовлению готовых растворов:
Раствор Бейерника:
| NH4Cl | 8 г |
| MgSO4×7H2O | 2 г |
| CaCl2×2H2O | 1 г |
| Вода дистилированная | до 1000 мл |
Раствор B:
| K2HPO4×3H2O | 37,73 г |
| KH2PO4 | 14,4г |
| Вода дистилированная | до 100 мл |
Раствор микроэлементов Hunters:
Для 1000 мл конечной смеси растворить каждое вещество в указанном количестве воды. EDTA следует растворять в кипящей воде, а FeSO4 готовить последним, чтобы избежать окисления.
вещество | масса | вода дистилированная |
| EDTA динатриевая соль | 50 г | 250 мл |
| ZnSO4×7H2O | 22 г | 100 мл |
| H3BO3 | 11,4 г | 200 мл |
| MnCl2×4H2O | 5,06 г | 50 мл |
| CoCl2×6H2O | 1,61 г | 50 мл |
| CuSO4×5H2O | 1,57 г | 50 мл |
| (NH4)6Mo7O24×4H2O | 1,1 г | 50 мл |
| FeSO4×7H2O | 4,99 г | 50 мл |
Смешать
все растворы за исключением EDTA. Довести до кипения, затем добавить
раствор EDTA. Смесь должна приобрести зеленый цвет. После полного
растворения охладить смесь до 70°С. Поддерживая температуру в70°С, добавить 85 мл горячего раствора 20% KOH (20г/100 мл конечного объема). Не использовать NaOH для доведения pH.
Довести
объем раствора до 1000 мл. Изначально он должен быть зеленого цвета.
Поместить раствор в колбу с ватной пробкой и выдерживать 1-2 недели,
встряхивая один раз в сутки. Раствор должен приобрести в итоге
пурпурный цвет и должен выпасть рыжевато-коричневый осадок, который
следует удалить через 2 слоя фильтровальной бумаги (Whatman#1). При
необходимости раствор нужно снова профильтровать. Хранить в
холодильнике или в виде замороженных аликвот.
Если
не образуется осадок, раствор пригоден для использования. В этом случае
надо проверить pH и довести его до 7,0, используя KOH или HCl.
2M Tris-AcOH (pH = 7,0). Порядок приготовления:
| TRIS | 242 г |
| Вода дистилированная | до 600 мл |
| AcOH | до pH=7 |
| Вода дист. | до 1000 мл |
Источники:
Gorman, D.S., R.P. Levine (1965) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 54, 1665-1669.
Hutner et al. (1950) Proc. Am. Philos. Soc. 94, 152-170